东台瑞正精密科技有限公司

联系我们

全国服务热线:

0515-85551166

0515-85956688

东台瑞正精密科技有限公司

地址:东台市梁垛镇工业大道9号

邮件:jakieeyuan@189.cn 

电话:0515-85551166/0515-85956688

联系人:袁先生

手机:13328046118 

网址:www.ruizhengtek.com

当前位置: 首 页 > 资讯动态 > 技术知识

影响电泳加工质量的因素分析

2022-09-01

影响电泳加工质量的因素分析

1.电泳介质的pH值东莞电泳加工溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等相似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因而,当别离某一种混合物时,电泳加工应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差其他pH值,以利于各种蛋白质的有用别离.为了确保电泳过程中溶液的pH值安稳,有必要采用缓冲溶液。

2.缓冲液的离子强度溶液的离子强度(Ionintensity)是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。低离子强度时,迁移率快,但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易保持pH安稳.高离子强度时,迁移率慢,但电泳谱带要比低离子强度时细窄。一般溶液的离子强度在0.02~0.2之间。不同带电颗粒,因其所带电荷的性质和多少、形状和巨细等差异,使其在同一电场强度、相同的支撑介质和缓冲液的条件下,各自的泳动速度不同,然后使各种不同的带电颗粒如蛋白质、核酸等生物大分子得以别离。带电颗粒在电场中泳动速度以迁移率(mobility)表明。故迁移率可定义为带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度,是指在1V/m的电场效果下,带电颗粒每秒钟移动的间隔(m),其移动速率为m/s,迁移率以m2/(V•s)表明。而在实践使用中以cm2/(V•s)表明,因而经过测量d、l、V、t,便可核算迁移率。I=1/2∑CiZi2(I:离子强度;Ci:离子的摩尔浓度;Zi:离子价数.)0.154MNaCl溶液的离子强度为:I=1/2(0.154×12+0.154×12)=0.1540.015MNa2SO4溶液的离子强度为:I=1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

1553821404701956.jpg

3.电场强度东莞电泳加工电场强度(电势梯度Electricfieldintensity)是指每厘米的电位降(电位差或电位梯度).电场强度对电泳速度起着正比效果,电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。依据实验的需求,电泳可分为两种:一种是高压电泳,所用电压在500~1000V或更高.因为电压高,电泳时间短(有的样品需数分钟),适用于低分子化合物的别离,如氨基酸,无机离子,包括部分聚焦电泳别离及序列电泳的别离等。因电压高,产热量大,有必要装有冷却设备,不然热量可引起蛋白质等物质的变性而不能别离,还因发热引起缓冲液中水分蒸腾过多,使支撑物(滤纸,薄膜或凝胶等)上离子强度增加,以及引起虹吸现象(电泳槽内液被吸到支撑物上)等,都会影响物质的别离.另一种为常压电泳,产热量小,室温在10~25℃别离蛋白质标本是不被损坏的,无需冷却设备,一般别离时间长。电场强度是指每1厘米的电位降,故又称电位梯度,以V/cm表明。电场强度对泳动速度起决定性效果。在必定范围内,电场强度愈高,带电颗粒泳动愈快,依据不同电泳所需电场强度,可分为常压电泳和高压电泳。常压电泳一般在100~500V,高压电泳一般为500~10000V。纸电泳、醋酸纤维电泳、聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳只需200~500V,而固相pH值梯度等电聚焦电泳则需求3000~5000V高压。电压与支撑介质的长度有关,而电流与支撑介质的横截面(或宽度)成正比。大部分电泳用恒压控制电场强度。在做管状圆盘电泳时,一般用调节每管的电流(mA)控制电场强度,在电泳过程中,保持安稳的电场强度或安稳的电流,是电泳成功与否的重要条件。

4.电渗现象东莞电泳加工在电场中液体关于一个固体的固定相相对移动称为电渗.在有载体的电泳中,影响电泳移动的一个重要因素是电渗。常遇到的情况是γ-球蛋白,由原点向负极移动,这是电渗效果所引起的倒移现象.发生电渗现象的原因是载体中常含有可电离的基团,如滤纸中含有羟基而带负电荷,与滤纸相触摸的水溶液带正电荷,液体便向负极移动。因为电渗现象往往与电泳同时存在,所以带电粒子的移动间隔也受电渗影响;如电泳方向与电渗相反,则实践电泳的间隔等于电泳间隔加上电渗的间隔.琼脂中含有琼脂果胶,,其中含有较多的硫酸根,所以在琼脂电泳时电渗现象很明显,许多球蛋白均向负极移动。除去了琼脂果胶后的琼脂糖用作凝胶电泳时,电渗大为减弱.电渗所造成的移动间隔可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支撑物的中心,以调查电渗的方向和间隔。

5.分子筛效应在不同浓度和交联度的凝胶中,其孔径巨细不同,经过分子筛效应可将不同巨细的颗粒进行别离,其别离机制是小分子经过凝胶微孔,而大分子颗粒难经过微孔而使迁移阻滞,然后将被别离的颗粒,按分子巨细的顺序排列进行别离。


标签

下一篇:没有了

Z近浏览: